家用快速流感自检的诊断准确性:前瞻性比较准确性研究gydF4y2Ba

简介gydF4y2Ba

背景gydF4y2Ba

在美国最近的流感季节(2019年10月至2020年4月)，估计有3200万至6200万人感染，导致1800万至2600万次医疗就诊，2.4万至6.2万人死亡[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba］．经济影响是成比例的——2018年季节性流感给美国造成了估计112亿美元的损失，其中包括32亿美元的直接医疗费用和估计2010万小时的生产损失[gydF4y2Ba2gydF4y2Ba］．对健康和经济的负面影响可以通过早期干预来诊断流感患者，并通过抗病毒治疗或行为改变进行干预以减少传播。gydF4y2Ba

仅根据临床特征诊断流感是不准确的;因此，一些临床指南支持对呼吸道标本(通常是鼻腔或鼻咽)进行实验室检测以检测流感病毒。流感的实验室检测已逐渐转向使用即时护理设备进行临床检测[gydF4y2Ba3.gydF4y2Ba］．快速诊断测试(RDTs)是POC测试的一类，只需几个简单步骤就可以完成，通常不需要仪器或特殊用品，这增加了未经训练的个人在临床环境之外使用这些测试的可能性[gydF4y2Ba4gydF4y2Ba］．家庭使用的流感快速诊断检测有可能扩大检测的覆盖面并降低成本，从而促进早期诊断并缩短从症状出现到适当护理的时间，例如接受抗病毒治疗或改变行为以最大限度地减少传播[gydF4y2Ba5gydF4y2Ba］．在大流行情况下，对流感和其他呼吸道病毒进行家庭检测的优势可能更加关键，因为隔离病例和限制与潜在病例的接触是遏制疫情的基本组成部分[gydF4y2Ba6gydF4y2Ba，gydF4y2Ba7gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

一些研究已经调查了自我擦拭和自我检测流感的准确性。最近一项对13项研究的系统回顾发现，流感是通过自行收集的鼻腔或中鼻甲样本检测出来的，其准确性与卫生保健专业人员收集的样本相似[gydF4y2Ba8gydF4y2Ba］．在常规卫生保健环境中检测的快速诊断检测的敏感性和特异性分别为60%至70%和90%至100% [gydF4y2Ba9gydF4y2Ba，gydF4y2Ba10gydF4y2Ba];然而，由于家庭测试的新颖性，在家庭环境中进行的RDTs研究很少。目前，美国食品和药物管理局(Food and Drug Administration)还没有批准用于在家检测流感的检测方法。gydF4y2Ba

在家检测流感或其他呼吸道病毒的一个主要障碍是，快速诊断检测通常不如基于实验室的检测准确，即使是由卫生保健工作者使用[gydF4y2Ba11gydF4y2Ba，gydF4y2Ba12gydF4y2Ba］．许多变量影响检测的性能，包括样本质量、感染流行率、发病后及时检测以及较轻病例的较低病毒载量。这些变量在POC设置中尚未得到充分研究[gydF4y2Ba9gydF4y2Ba，gydF4y2Ba13gydF4y2Ba-gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]或在家的人群;据我们所知，只有一项公开的研究试图评估在家中使用RDT进行完整自测的准确性和可行性[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

客观的gydF4y2Ba

在这项研究中，我们评估了由患有流感样疾病的非专业用户在家进行的流感RDT的准确性，并将同一个人自行收集的样本邮寄到实验室进行参考检测的准确性进行了比较。gydF4y2Ba

方法gydF4y2Ba

研究设计gydF4y2Ba

我们在一个经历急性呼吸道疾病(ARI)的个人方便样本中进行了一项前瞻性、比较准确性的家庭流感RDT研究。这项研究是西雅图流感研究(SFS)的一个子研究，该研究对流感和其他呼吸道病毒感染进行了全市社区监测。SFS涉及当日自拭子样本[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba];在此报告的自检亚研究中合格并参与的参与者接受了额外的家庭流感RDT。RDT结果与邮寄回的自我收集的中鼻甲鼻拭子样本的结果进行比较，并采用实验室定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测，如下所述[gydF4y2Ba17gydF4y2Ba］．参与者还回答了一份问卷，其中包括他们的症状、风险因素和人口统计信息。gydF4y2Ba

伦理批准gydF4y2Ba

该研究由华盛顿大学人类受试者部门(STUDY00006181)批准，并在研究入组前获得知情同意。本研究的报告遵循standard(诊断准确性研究报告标准)指南[gydF4y2Ba18gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

招聘gydF4y2Ba

研究人员通过Facebook、Instagram、Twitter和谷歌等网站上的定向网络广告招募了参与者。另外还通过由社会安全服务局设立的社区服务站、医疗保健提供者、旅行诊所、移民和难民健康检查、当地学校和工作场所亲自推荐的方式进行了招募。潜在的参与者被引导到一个研究网站，在那里他们根据年龄、邮政编码、症状、症状出现的时间和他们的智能手机操作系统进行筛选。参与者完成研究程序后可获得电子礼品卡形式的20美元补偿;如果他们归还了参考棉签，但没有完成调查，他们仍能得到15美元的补偿。gydF4y2Ba

样本大小gydF4y2Ba

招募目标是招募3000名参与者参与研究，假设2400名(80%)参与者将完成所有步骤，流感患病率为12.5%，这将为我们提供300个流感阳性样本。研究完成后，所有参与者都收到了最高20美元的电子礼品卡。gydF4y2Ba

参与者gydF4y2Ba

参与者于2020年2月19日至3月9日从美国华盛顿州的大西雅图地区招募，该地区人口为74.4万。资格标准包括自认为在过去72小时内有咳嗽或至少两种新的或恶化的急性呼吸道感染症状(即发烧、头痛、寒战或发抖、喉咙痛、恶心或呕吐、流鼻涕或鼻塞、不适、肌肉或身体疼痛、呼吸困难、腹泻、皮疹、耳痛或分泌物)[gydF4y2Ba19gydF4y2Ba，gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba］．此外，参与者必须年龄≥5岁，居住或工作在符合条件的邮政编码范围内，能够理解英文研究说明，并能够在蓝牙设备上使用研究应用程序进行研究程序和Ellume家庭流感测试(EHFT)。gydF4y2Ba

测前数据收集gydF4y2Ba

参与者通过电子方式同意;年龄<18岁的参与者需要父母或合法监护人的同意，年龄在13岁至18岁的参与者需要使用REDCap(研究电子数据采集;范德堡大学)[gydF4y2Ba21gydF4y2Ba，由华盛顿大学转化健康科学研究所主办。经同意后，REDCap工具获得了参与者的家庭地址和联系信息，以便通过快递员递送流感工具包。gydF4y2Ba

流感试剂盒组件和交付gydF4y2Ba

流感检测试剂盒由研究小组制作，以符合美国装运生物物质(B类)规例[gydF4y2Ba22gydF4y2Ba］．流感工具包包含1个指导性快速入门指南;一种被标记为研究设备(EHFT)的流感RDT，包括中鼻甲拭子、缓冲液、滴管和蓝牙采样分析仪;参考样本试剂盒，包含1根中鼻甲拭子(Copan, FLOQSwabs 56380CS01)， 1根含有3 mL病毒传输介质的试管(VTM;目录# 220220;Becton, Dickinson and Company Ltd)， 1个带吸水袖的标本运输袋(猫。# 11215 - 684;VWR International LLC)， 1个退货箱(S-16524;ULINE)和1个回执邮件(S-3355;ULINE)第二层包装。 If participants reported errors with the EHFT, a second kit was sent out as soon as possible during staffing hours (within 12 hours).

流感测试包在登记后24小时内送到参与者家中，大多数在2小时内送到。在工作时间之后收到的登记信息会在第二天早上处理并邮寄出去。每个试剂盒都包含一个唯一的条形码号码(位于每个试剂盒的以下三个位置:在3ml试管上，回函和快速入门指南上)，以链接调查，EHFT结果和参考测试结果进行分析。参与者被要求确认其工具包试管上的条形码与快速入门指南上的条形码相匹配，并在REDCap调查中输入此条形码。在向同一家庭发送多个试剂盒的情况下，在REDCap中输入的条形码可以将实验室收到的参考样本与正确的参与者联系起来，即使在参与者之间切换试剂盒也是如此。一旦参与者完成了他们的在家学习程序，他们被要求在完成测试的24小时内，使用所提供的材料，通过美国邮政服务将参考样本邮寄到华盛顿大学的研究实验室。gydF4y2Ba

在家测试和数据收集gydF4y2Ba

在家中收到流感工具包后，参与者被要求完成一份关于REDCap的问卷调查(通过电子邮件发送)。这包括关于他们的症状和暴露风险的问题，包括住房、健康状况、最近的旅行和人口统计数据(gydF4y2Ba多媒体附件1gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

参与者被要求将EHFT应用程序下载到他们的蓝牙设备上。该应用程序提供了一个教学视频，然后在屏幕上逐步说明使用所附的自定义鼻甲棉签进行样本自我收集。参与者被指示在他们的两个鼻孔的鼻腔周围插入和旋转棉签3次。然后，他们将棉签样本放在缓冲液中，将缓冲液添加到分析仪中，等待12分钟来处理样本。然后，分析仪通过蓝牙和安全研究数据库将测试结果直接发送到用户设备上的EHFT应用程序。当参与者使用实验研究设备时，他们对EHFT测试结果一无所知。参加者收到一份gydF4y2Ba谢谢你！gydF4y2Ba一旦他们的样本被处理，他们就会在EHFT应用程序中显示屏幕，这指示他们参考研究说明来完成他们的参考样本，如果他们担心自己的症状，就联系他们的医疗保健提供者。gydF4y2Ba

研究人员还要求参与者按照快速入门指南和REDCap调查中的书面和照片说明，使用流感工具包中的棉签获取第二枚中鼻甲棉签(gydF4y2Ba多媒体附件1gydF4y2Ba)．他们被指示将棉签插入任意一个鼻孔的一半(大约1英寸)，按压一侧，旋转5次。然后指示他们将棉签放入收集管，重新包装所有组件，以符合美国运输生物物质的规定(UN3373 B类)[gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]，然后通过美国邮政服务送回华盛顿大学的研究实验室。gydF4y2Ba

参与者在入组7天后接受了随访调查，其中包括他们的疾病持续时间和严重程度、最近的旅行以及对研究团队的反馈(gydF4y2Ba多媒体附件1gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

参考测试gydF4y2Ba

对实验室收到的退回试剂盒进行检查，并记录样品或包装损坏的任何证据。将样品分成2份，每份1ml，其中一份在- 80℃冷冻，另一份在4℃保存，直到提取。所有样品一式两份。使用Magna Pure 96小体积总核酸提取试剂盒(product #06543588001;罗氏公司)。利用TaqMan OpenArray平台(Thermofisher)进行呼吸道病原体qRT-PCR检测纯化的总核酸。OpenArray面板包括甲型H3N2流感、甲型H1N1流感和泛甲型流感的探针序列;乙型流感;丙型流感;呼吸道合胞病毒(RSV) A和B; human coronavirus 229E, NL63, OC43, and HKU1; adenovirus; human rhinovirus; human metapneumovirus; human parechovirus; enterovirus A, B, C, D, D68, and G; human bocavirus; and链球菌引起的肺炎gydF4y2Ba，gydF4y2Ba肺炎支原体gydF4y2Ba,gydF4y2Ba衣原体肺炎gydF4y2Ba．OpenArray面板还包括用于人类基因核糖核酸酶P (RNase P)的探针，作为样品质量的指标。所有定量数据以相对周期阈值(Crt)的形式被捕获，该值比等效的定量聚合酶链反应周期阈值大约小10个周期。gydF4y2Ba

实验室人员在解释参考含量时无法获得EHFT结果或临床信息。如果qRT-PCR在40个聚合酶链式反应(PCR)周期内产生通道特异性病原体的荧光信号，则参考试验被认为是病原体阳性gydF4y2Ba．gydF4y2BaEHFT或实验室结果对参与者是不可见的。gydF4y2Ba

2020年5月，在数据收集完成后，参与者被问及是否希望选择接收其参考棉签的结果。如果参与者选择结果，他们的样本的第二份样品将被解冻并使用临床实验室改进修订豁免GeneXpert Xpress (Cepheid)进行测试gydF4y2BaXpert快速流感/RSVgydF4y2Ba墨盒，遵循制造商的说明。造父变星结果区分了甲型流感、乙型流感和RSV。如果检测到流感或呼吸道合胞病毒，将通知参与者。此外，在3月4日至3月9日期间同意参加这项研究的参与者，如果他们的参考样本中检测到SARS-CoV-2，他们会得到实时通知。gydF4y2Ba

数据分析gydF4y2Ba

创建了参与者流程图，展示了研究中的每个主要步骤和参与者退出。对参与者的人口统计、危险因素、ARI症状、症状严重程度和其他检测到的病原体进行汇总统计。计算参比试验阳性(PCR阳性)和阴性(PCR阴性)受试者之间的危险因素、症状存在和症状严重程度的Pearson卡方检验及Yate连续性校正。gydF4y2BaPgydF4y2Ba值<。05例被认为有统计学意义。我们计算症状发作时间为自我报告症状发作日期与EHFT完成的确切时间之间的差值。参与者被指示在进行EHFT后立即收集参考棉签。gydF4y2Ba

我们计算了指标试验(EHFT)与参考试验(OpenArray qRT-PCR)的总体表现的敏感性、特异性以及阳性和阴性似然比(95% CI)，并独立地计算了甲型和乙型流感的敏感性、特异性和阳性和阴性似然比。此外，我们还分析了先前已被证明会影响病毒载量的亚组数据[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba-gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]，即检测前的症状发作情况，病情严重程度以症状总数(1-9个症状)和疾病对日常生活造成的干扰(1-5级，1为完全没有，5为非常严重)来衡量。对于每个亚组，我们计算敏感性、特异性以及95% CI的阳性和阴性似然比。我们使用单向方差分析和Tukey诚实显著性差异检验对亚组之间的活动影响的平均水平进行了两两比较。在适当的情况下，计算Pearson相关性。gydF4y2Ba

平均流感Crt值被用作相对病毒载量的代理;较低的Crt值对应较高的病毒载量，因此产生足够OpenArray信号的周期较短[gydF4y2Ba27gydF4y2Ba］．每增加一个Crt周期，就相当于病毒RNA的基因组拷贝减少了大约2倍。计算了以下亚组的平均值和SDs:症状发作、流感亚型、儿童和成人(5-17岁vs≥18岁)以及真阳性(TP) vs假阴性(FN)亚组。使用学生2尾法对各亚组的平均流感Crt进行两两比较gydF4y2BatgydF4y2Ba测试。分别拟合了多个线性回归模型，以平均Crt值作为症状发作的函数，并根据年龄和症状数量及其对日常活动的影响程度进行了调整，两者均根据年龄和症状发作进行了调整。gydF4y2Ba

RNase P Crt值作为参考样品质量的指标;较低的Crt对应于样本中更多的内源性人类DNA，表明更有可能在棉签上收集到足够的物质[gydF4y2Ba25gydF4y2Ba，gydF4y2Ba28gydF4y2Ba，gydF4y2Ba29gydF4y2Ba］．采用Kruskal-Wallis秩检验和Dunn多重比较事后检验(Holm-Bonferroni校正)比较年龄组之间、TP、假阳性(FP)、FN和真阴性检验结果亚组之间RNase P Crt值的中位数。采用Mann-Whitney方法比较pcr阳性组和pcr阴性组、流感a阳性组和流感b阳性组、儿童(年龄≤18岁)和成人(年龄> - 18岁)组之间RNase P Crt值的中位数gydF4y2BaUgydF4y2Ba测试。gydF4y2Ba

EHFT缺失或不确定的参与者或参考样本被从分析中移除。使用R (version 1.3.1056;R统计计算基础)[gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba］．gydF4y2Ba

结果gydF4y2Ba

招募和保留参与者gydF4y2Ba

共有958名参加者符合纳入标准(gydF4y2Ba图1gydF4y2Ba)，其中780人(81.4%)填写了同意书，提供了可行的送货地址，并收到了流感工具包。在收到测试包的780名参与者中，有630人(80.8%)完成了指数测试。在症状出现34天后完成指数测试的一个个体被排除在外。在完成指数测试的630名参与者中，605人(96%)将参考样本返回实验室，并纳入我们的分析。最终纳入分析的研究样本是605名完成了指标和参考测试的参与者。gydF4y2Ba

大多数参与者是通过Facebook、Instagram或Twitter上的广告招募的(184/ 605,30.4%);朋友或家人推荐(181/605,29.9%);以及其他网络媒体(138/605,22.8%)。谷歌广告和卫生保健提供者推荐比其他招聘方法招募了更多的流感阳性参与者。gydF4y2Ba

‎gydF4y2Ba 查看此图gydF4y2Ba

参与者人口gydF4y2Ba

大多数参与者年龄在25-44岁之间，女性，白人，并已完成学士学位或以上(gydF4y2Ba表1gydF4y2Ba)．大多数人都有私人医疗保险，接种了2019年流感疫苗，而且不吸烟。年龄(gydF4y2BaPgydF4y2Ba=.02)和教育(gydF4y2BaPgydF4y2Ba=.02)与流感PCR检测阳性显著相关;然而，接种2019-2020年流感疫苗与流感PCR检测呈阳性无关。报告的最常见症状为疲劳(438/605,72.4%)、喉咙痛(414/605,68.4%)、咳嗽(355/605,58.7%)、头痛(342/605,56.5%)和发烧(292/605,48.3%);gydF4y2Ba表2gydF4y2Ba)．发烧、咳嗽、发冷或发抖、出汗、恶心或呕吐、肌痛(所有症状)gydF4y2BaPgydF4y2Ba值<.001)，疲劳度(gydF4y2BaPgydF4y2Ba=.007)、流鼻涕(gydF4y2BaPgydF4y2Ba=.04)，以及呼吸困难(gydF4y2BaPgydF4y2Ba=.05)均与PCR检测阳性显著相关。流感PCR阳性的参与者更有可能报告中度或重度发烧(gydF4y2BaPgydF4y2Ba<.001)，咳嗽(gydF4y2BaPgydF4y2Ba<.001)，疲劳(gydF4y2BaPgydF4y2Ba<.001)，肌痛(gydF4y2BaPgydF4y2Ba<.001)，喉咙痛(gydF4y2BaPgydF4y2Ba=.04)。TaqMan OpenArray检测出30.7%(186/605)的参与者除流感外，对≥1种呼吸道病原体检测呈阳性，其中一些是A型或B型流感合并感染(gydF4y2Ba多媒体附件2gydF4y2Ba)．除流感外，最常见的呼吸道病原体是鼻病毒(77/186,41.2%)和季节性人类冠状病毒(50/186,26.9%)。gydF4y2Ba

几乎所有(604/ 605,99.8%)参与者在症状出现后15天内完成EHFT(范围0.6-14.4天;gydF4y2Ba多媒体附件2gydF4y2Ba)，从症状出现到EHFT检测的平均时间为2.9天(SD 1.5天)。在605名参与者中，344人(56.9%)在症状出现后72小时(3天)内服用EHFT, 249人(41.2%)在症状出现后4 - 7天内服用EHFT, 12人(1.9%)在症状出现后8 - 15天内服用EHFT。症状出现和EHFT检测之间的最长中位数时间间隔段是症状出现和研究登记之间(中位数48小时)，而从登记到试剂盒运输(中位数1.25小时)和从试剂盒运输到检测(中位数5.33小时)。gydF4y2Ba

RDT精度gydF4y2Ba

在605名参与者中，87名(14.4%)参与者通过参考试验检测出流感阳性(70/87,80%为A型流感，17/87,20%为B型流感)。EHFT与参考试验相比，总体敏感性和特异性分别为61% (95% CI 50-71)和95% (95% CI 93-97)gydF4y2Ba表3gydF4y2Ba对于精度值)。EHFT对甲型流感的敏感性和特异性分别为60% (95% CI 48-72)和99% (95% CI 98-100)，对乙型流感的敏感性和特异性分别为65% (95% CI 38-86)和96% (95% CI 94-98)。B型流感产生了更高的FP测试率，其阳性预测值(PPV)为33% (95% CI 18-52)。gydF4y2Ba

基于从症状出现到实施EHFT时间的EHFT准确性亚组分析(gydF4y2Ba表3gydF4y2Ba)显示，在症状出现≤72小时时，甲型流感检测的敏感性和特异性分别为62.5% (95% CI 48-77)和100% (95% CI 98-100)，而在>72小时时，敏感性和特异性分别为57% (95% CI 37-75)和99% (95% CI 97-100)。B型流感在≤72小时的敏感性和特异性分别为64% (95% CI 31-89)和95% (95% CI 92-97)，而在>72小时的敏感性和特异性分别为67% (95% CI 22-96)和98% (95% CI 95-99)。gydF4y2Ba

疾病严重程度与EHFT敏感性之间无相关性(gydF4y2Ba多媒体gydF4y2Ba)．症状数量和日常活动中断与EHFT敏感性均无显著相关性，这些指标与平均流感Crt之间也无显著相关性。然而，疾病严重程度的测量是相互关联的;报告日常活动受到更多干扰的个体也报告了更多的症状(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.54;gydF4y2BaPgydF4y2Ba<.001)， PCR阳性的个体与PCR阴性的个体相比，在这两项指标上的得分显著更高(gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施;gydF4y2Ba多媒体gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

在25个FP结果中，22个(88%)发生在EHFT显示存在B型流感时，且全部发生在症状出现后96小时内(gydF4y2Ba多媒体gydF4y2Ba)．其他呼吸道病原体，即RSV，人偏肺病毒gydF4y2Ba，gydF4y2Ba人类冠状病毒gydF4y2Ba，gydF4y2Ba而且gydF4y2Ba链球菌引起的肺炎gydF4y2Ba，在32%(7/22)的流感B型FP样本中检出。gydF4y2Ba

流感CrtgydF4y2Ba

所有流感pcr阳性样本的平均流感Crt值为18.82，症状出现后≤72小时收集的样本(17.9,SD 4.4)明显低于症状出现后72小时收集的样本(20.14,SD 4.2;gydF4y2BaPgydF4y2Ba= .02点;gydF4y2Ba表4gydF4y2Ba)．TP组的平均流感Crt值(16.8,SD 4.0)明显低于FN组(22.0,SD 3.0)。gydF4y2BaPgydF4y2Ba<措施)。B型流感的平均流感Crt值(16.7,SD 4.4)也明显低于A型流感(19.3,SD 4.3;gydF4y2BaPgydF4y2Ba= .04点)。多元回归估计，症状出现后每增加一天，平均Crt增加1.34 (95% CI 39-2.29) Crt (gydF4y2BaPgydF4y2Ba=.006)，且Crt值随着症状数量的增加而降低(gydF4y2BaPgydF4y2Ba= .03点;gydF4y2Ba多媒体附件4gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

研究程序和标本质量的用户体验gydF4y2Ba

总的来说，参与者说他们是gydF4y2Ba有点自信gydF4y2Ba(216/560, 38.5%)或gydF4y2Ba非常有信心gydF4y2Ba(337/ 560,60.1%)表示他们正确完成了参考棉签，仅经历了轻微的不适(431/ 560,76.8%;gydF4y2Ba多媒体gydF4y2Ba)．EHFT的情况与此类似，参与者都表示自己是gydF4y2Ba有点自信gydF4y2Ba(188/567, 33.5%)或gydF4y2Ba非常有信心gydF4y2Ba(371/567, 66.1%)，仅经历轻度不适(427/567,76.1%)。只有0.3%(2/567)的参与者报告了EHFT设备的蓝牙组件的错误，并发送了新的设备。该设备没有向研究团队报告其他问题。gydF4y2Ba

参考样品RNase P Crt值范围为10.89 ~ 33.3个周期(中位数21.1,SD 4.3, IQR 16.7 ~ 24.1)。RNase P Crt在流感阳性样本(中位数22.7,SD 4.32)和流感阴性样本(中位数20.7,SD 4.32;gydF4y2BaPgydF4y2Ba=.05)或根据年龄或流感亚型(gydF4y2Ba多媒体gydF4y2Ba)．所有样本的Rnase P Crt值均远低于40周期截止值，只有4个样本为>30(31.5、32.4、32.5和33.3)。所有亚组的中位数均在28 Crt的推荐质量范围内[gydF4y2Ba31gydF4y2Ba］．根据RNase P Crt值，没有样本被排除。gydF4y2Ba

在7.8%(46/587)的返回试剂盒中，发现了≥1个错误，表明这些参与者没有正确地遵循≥1个提供的指令。在这46个试剂盒中，23个(50%)因包装错误(丢失外盒或标本袋密封不正确)而被退回，27个(59%)因VTM管上的标签不正确而被退回(gydF4y2Ba多媒体gydF4y2Ba)．gydF4y2Ba

讨论gydF4y2Ba

主要研究结果gydF4y2Ba

这项研究证明了实施无监督的家庭诊断测试的可行性。绝大多数参与者能够在没有直接监督的情况下完成评估家庭流感检测所需的多个程序，包括调查、2次中鼻甲拭子、应用程序指导下完成流感RDT，以及通过邮件将参考样本返回到中央实验室。在我们的研究样本中，流感阳性为14.4%(87/605)，其中80%(70/87)为甲型流感病例，这与研究期间当地报告的流感病毒流行率和相对比例一致[gydF4y2Ba32gydF4y2Ba］．与实验室PCR相比，EHFT具有中等敏感性(61%)和高特异性(95%)。A型流感的特异性(99%)略高于B型流感(96%)，而B型流感的敏感性(65%)略高于A型流感(60%)，尽管ci范围广泛且重叠。当独立于甲型流感(68%)进行分析时，B型流感PCR阳性的参与者比例小，B型流感FPs率高，导致B型流感的PPV(33%)要低得多。gydF4y2Ba

TP EHFT结果的流感Crt值明显低于FN EHFT结果(对应较高的病毒载量)，提示较低的病毒载量可能影响了EHFT的敏感性。为了进一步研究这种关系，我们评估了已知影响病毒载量的2个额外变量的EHFT准确性，即症状发作和疾病严重程度[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba-gydF4y2Ba26gydF4y2Ba，gydF4y2Ba33gydF4y2Ba，gydF4y2Ba34gydF4y2Ba］．EHFT敏感性与症状发作有关，当在症状发作后72小时内进行测试时，敏感性有中度改善(6%)。此外，我们注意到症状发作和Crt值之间存在线性关系，在症状发作和检测之间每增加一天对应于估计病毒数量平均增加1.3个周期(即减少2倍以上)。相比之下，疾病严重程度似乎也没有影响EHFT敏感性，在测试准确性和症状数量之间没有观察到关系，也没有对日常活动产生更大的影响。然而，这两种疾病严重程度的测量方法彼此相关，这与报告症状较多的个体日常活动受到更大干扰的预期是一致的。值得注意的是，尽管在本研究中不能预测病毒载量，但PCR阳性个体对流感严重程度的两种测量均显著高于PCR阴性个体。gydF4y2Ba

我们没有发现任何证据表明自我采样的质量会影响EHFT的准确性，也没有发现特定人群比其他人更有能力收集自我棉签。相反，我们发现阴性参考棉签的RNase P Crt值低于阳性样本。如果样品质量影响了参考棉签，我们预计相反阴性的参考棉签质量较差，因此RNase P Crt值较高。中位数RNasegydF4y2BaPgydF4y2Ba测试精度子组的值都在可接受的范围内。gydF4y2Ba

与以往研究的比较gydF4y2Ba

我们报道的EHFT的准确性与其他流感快速诊断的准确性相当。2017年对134项流感快速诊断检测研究的荟萃分析显示，敏感性(61%，95% CI 53.3-68.3)和特异性(98.9%，95% CI 98.4-99.3)的汇总估计[gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]，与本研究中报道的结果相当。这些结果与另外两项荟萃分析的结果一致[gydF4y2Ba10gydF4y2Ba，gydF4y2Ba14gydF4y2Ba］．考虑到已发表的关于流感快速诊断准确性的研究是在卫生保健环境中进行的，由卫生保健工作者和研究人员而不是患者自己进行抽样和快速诊断，检测准确性的相似性就更加值得注意了。gydF4y2Ba

从症状出现到检测的时间，或症状出现的时间，对病毒载量和流感RDT的准确性有关键影响[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba，gydF4y2Ba35gydF4y2Ba］．邮寄检测试剂盒的缺点之一是，由于分发拭子材料需要时间，出现症状后检测会延迟[gydF4y2Ba16gydF4y2Ba，gydF4y2Ba36gydF4y2Ba］．Elliot等人[gydF4y2Ba36gydF4y2Ba]报告从症状出现到自我拭子取样之间平均为4天，而临床医生收集的样本为2天。同样，我们发现流感Crt随着症状发作时间的延长而降低[gydF4y2Ba36gydF4y2Ba］．从发病到检测的平均时间较短的研究往往报告较高的敏感性值[gydF4y2Ba13gydF4y2Ba］．相反，一项研究发现过早检测可能导致fn增加，主要是在症状出现后12小时内使用RDT [gydF4y2Ba15gydF4y2Ba]，这表明可能存在一种gydF4y2Ba甜点gydF4y2Ba用于流感的RDT检测，必须与影响检测灵敏度的其他因素相平衡。此外，我们没有发现病毒脱落与疾病严重程度之间的关系[gydF4y2Ba24gydF4y2Ba-gydF4y2Ba26gydF4y2Ba，gydF4y2Ba33gydF4y2Ba，gydF4y2Ba34gydF4y2Ba］．这可能是因为我们使用的疾病严重程度测量方法在我们的环境或人群中缺乏有效性，而且我们的人群中疾病严重程度的范围太窄。更有力地了解病毒载量动态，特别是在病情不太严重的人群中，将有助于阐明在何种条件下最适合进行家用快速检测。gydF4y2Ba

自采集棉签的质量似乎不影响EHFT的准确性。参与者报告对完成EHFT拭子和参考测试拭子都有很高的信心。此外，参考棉签的RNase P Crt值(当校正到等效的周期阈值时)趋于较高，但在临床收集和自我收集的中鼻甲棉签的其他研究报告的范围内[gydF4y2Ba28gydF4y2Ba，gydF4y2Ba37gydF4y2Ba］．EHFT棉签指示要求参与者擦拭两个鼻孔。一个可能的解释是，在EHFT拭子之后完成的参考拭子上的RNase P Crt值较低，可收集的人类细胞碎片较少。这也可能影响了流感Crt值。虽然RNase P Crt在个体之间存在差异，但TP、FN、FP和真阴性组之间没有观察到差异，这表明样本收集不影响EHFT的准确性。gydF4y2Ba

我们发现乙型流感EHFT的准确性较低(包括计划生育结果)与其他文献一致[gydF4y2Ba38gydF4y2Ba-gydF4y2Ba40gydF4y2Ba可能是由几个因素造成的。在研究期间，研究集水区的乙型流感流行率较低(3%-4%)[gydF4y2Ba32gydF4y2Ba];已知疾病流行率低会影响预测值[gydF4y2Ba41gydF4y2Ba，gydF4y2Ba42gydF4y2Ba］．其他关于流感快速诊断检测的研究也注意到乙型流感的FPs高于甲型流感[gydF4y2Ba38gydF4y2Ba-gydF4y2Ba40gydF4y2Ba]，表明与用于检测B型流感的抗体有非特异性反应。gydF4y2Ba

优势与局限gydF4y2Ba

这是第一个报告无监督参与者使用的流感实时检测仪器准确性的研究，也是第一个专门为家庭使用设计的实时检测仪器的研究。我们的研究设计包括基于网络的远程招募、携带RDT和参考样本收集材料的流感试剂盒的运输，以及在没有研究人员直接监督的情况下由用户完成所有阶段的研究。研究程序的高应答率和完成率(605/ 780,77.6%)与EHFT和参考样本程序的高自我报告置信度相匹配。有22.4%(175/780)的参与者退出，他们收到了工具包，但没有参加;尚不清楚这是否引入了额外的偏倚，但与其他基于邮件的测试研究一致[gydF4y2Ba43gydF4y2Ba］．尽管在所需的运输程序中偶尔会出现错误，但绝大多数样品都以适当的条件返回了研究实验室。参与者的症状可能比参加临床治疗的人更轻，尽管这可能会影响RDT的敏感性，降低病毒脱落，但他们代表了将使用这种RDT的人群。我们的研究结果支持这种类型的研究设计，用于评估流感和其他呼吸道病毒(如SARS-CoV-2)的自测。gydF4y2Ba

这项研究有几个局限性。首先，参与者受教育程度更高，会说英语，有私人保险和访问权限，并且能够使用蓝牙移动应用设备。未来的研究可能会通过本研究中使用的社交媒体广告之外的各种招聘方法来解决这一局限性;然而，这种类型的研究设计依赖于基于互联网和应用程序的数据收集，这固有地限制了研究人群。其次，许多个体(261/ 605,43.1%)没有在发病后72小时内进行EHFT，这可能是因为从招募、运送试剂盒到参与者在收到后完成EHFT需要一段时间。未来的家庭测试研究应探索在疾病早期识别有症状的个体并方便地提供测试的解决方案。例如，队列研究通过短信或电子邮件定期进行自我报告症状调查，以早期识别流感并及时进行检测[gydF4y2Ba44gydF4y2Ba，gydF4y2Ba45gydF4y2Ba]或通过预先放置流感试剂盒或其他家庭检测设备。第三，尽管参与者报告了自我采集棉签的信心，这些样本中的人类DNA标记证实了这一点，但对于这种类型的参考样本的有效性仍然存在一些不确定性。最后，由于当地COVID-19大流行导致研究启动延迟和过早结束，我们招募了不到所需样本量的三分之一(而且只有少量B型流感感染)。更大的样本量可以提供更紧密的测试准确度估计值ci。此外，在我们招募的社区中，SARS-CoV-2的传播可能影响了EHFT的准确性。入选标准旨在针对急性呼吸道感染，因此可能偶然招募了表现出类似流感症状的COVID-19患者gydF4y2Ba．gydF4y2Ba不幸的是，由于我们实验室与县公共卫生办公室合作实施的隐私协议，我们无法分析SARS-CoV-2的参考样本，也无法确定它可能对EHFT准确性产生的影响。根据这段时间SARS-CoV-2的血清流行率[gydF4y2Ba46gydF4y2Ba]，似乎不太可能有足够的COVID-19病例在西雅图地区传播，导致测试性能大幅下降，尽管它可能对ARI的PPV有轻微影响。gydF4y2Ba

对临床医生、研究人员和政策制定者的启示gydF4y2Ba

为家庭使用而设计的快速诊断有可能在柜台购买或由卫生保健提供者开具处方，并在必要时辅以面对面或远程医疗咨询，以指导护理[gydF4y2Ba47gydF4y2Ba］．本文报道的流感EHFT的准确性与临床环境中使用的许多快速诊断方法的准确性相似，这支持在类似人群中使用，前提是采取适当的预防措施，特别是降低FN结果的风险。这可能包括使用临床预测规则来帮助潜在的RDT用户量化他们的流感检测前概率。我们的研究结果支持在症状出现72小时内的个体中使用EHFT，并提示需要进一步研究以了解可用于选择应或不应推荐这种类型RDT的个体的病毒载量的其他指标。gydF4y2Ba

我们的研究设计提供了一个模型，用于在家庭环境中对流感和其他呼吸道病原体(包括SARS-CoV-2)进行快速诊断检测的比较准确性研究。我们建议未来的研究设计优先考虑尽量缩短从症状出现到研究登记进行指数测试的时间，特别是对于流感等感染，其病毒脱落在症状出现后迅速下降。策略可以包括预先放置检测试剂盒和鼓励在发病时尽早完成RDT。考虑到流感严重程度和病毒载量之间潜在的重要关系(因此自检敏感性)，我们也鼓励使用更准确的方法从自我报告的调查中衡量疾病严重程度。最后，与其让参与者对RDT结果视而不见，不如公布自检结果将有助于招募，并允许探索积极和消极自检结果对参与者寻求健康和其他行为的影响。gydF4y2Ba

结论gydF4y2Ba

通过完全基于社区的远程招募研究设计，我们的研究结果表明，EHFT与临床环境中使用的许多流感快速诊断具有相当的准确性。然而，EHFT的敏感性仅为中等，当在症状出现后72小时内使用该测试时，敏感性更高，此时病毒脱落可能是最高的。我们的研究结果支持一种新的试验设计形式，在这种形式中，招募和自我抽样的参考测试可以由将实施这些测试的社区和人群中的非专业用户成功地进行。这种研究设计可用于评估其他病毒性呼吸道病原体检测的准确性，如SARS-CoV-2和RSV。家庭检测有可能扩大对传染病的检测，为个人和卫生保健系统带来潜在利益。gydF4y2Ba